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酶聯免疫法原理

[ 更新時間:2014-05-10 ]

簡介

  酶聯免疫吸附劑測定法 ,簡稱 酶聯免疫法 ,或者 ELISA法 。
  它的中心就是讓抗體與 酶復合物 結合,然后通過顯色來檢測。
 

步驟

 ELISA用血清來檢測,首先血液要經過至少半個小時的凝集,然后取 血清 。將酶復合物用稀釋液稀釋后,加血清及陰性、陽性對照,還有就是質控品(這是嚴格的要求,它的范圍必須在質控范圍內)。經過一個小時的孵育,然后洗板,加 底物 ,半個小時避光反應后加終止液即完成反應部分,然后就是讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。
 

基本原理

?、偈箍乖蚩贵w結合到某種固相載體表面,并保持其 免疫活性 。
 ?、谑箍乖蚩贵w與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。
  ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:
 ?、俟滔嗟目乖蚩贵w
 ?、诿笜擞浀目乖蚩贵w
 ?、勖缸饔玫牡孜?。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
 

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